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化學(xué)發(fā)光試劑的配置 在使用前等量混合A液和B液,混合后盡快使用。將膜片置混合液中于室溫下振蕩溫育2分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片。蛋白信號顯現(xiàn)
.用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙以吸去過量試劑。置膜片于二層保鮮膜之間,小心趕盡氣泡。將膜片吸附蛋白面朝上,置于X光片盒中。于暗室中壓上X光片。根據(jù)信號的強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時間,一般為1min或5min,也可選擇不同時間多次壓片,以達(dá)*效果。顯影沖洗。調(diào)節(jié)曝光時間,再次曝光顯影。
化學(xué)發(fā)光試劑本試劑是非放射性發(fā)光系統(tǒng),用于檢測固定在膜上的蛋白,其敏感性達(dá)1-5pg。用X光片可快速地獲得*的硬拷貝結(jié)果。所含*的底物足以維持12小時以上的發(fā)光,便于反復(fù)曝光操作,免疫印跡膜經(jīng)抗體脫卸處理后可供再次抗體探查使用。適用于痕量蛋白或核酸檢測。
化學(xué)發(fā)光試劑原理:辣根過氧化酶使試劑中的發(fā)光物(Luminol)氧化并發(fā)光,而試劑中含有增強(qiáng)劑這使得發(fā)光增強(qiáng)了1000倍。在免疫印跡中,將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)SDS-PAGE分離,并轉(zhuǎn)移到固相膜上(如NC、PVDF)等,用于免疫學(xué)檢測,經(jīng)HRP標(biāo)記的抗體與膜上的蛋白直接(標(biāo)記一抗)或間接(標(biāo)記二抗)反應(yīng)。當(dāng)加入免疫印跡化學(xué)發(fā)光試劑后,Luminol發(fā)生氧化降解,并發(fā)射波長為428nm的光,此光可經(jīng)X光膠片(放射自顯影片)感光記錄下來。更多相關(guān)知識,可以與本公司.